cyclin G1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402045
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- cyclin G1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico cyclin G1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: cyclin G1 Anticuerpo (F-5): sc-8016
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
cyclin G1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-402045 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
CCNG1 codifica la ciclina G1, una ciclina atípica que se induce rápidamente ante el estrés celular e integra señales de la red de p53 para modular la progresión del ciclo celular y el control de los puntos de control. La ciclina G1 participa en la regulación por retroalimentación de la actividad de p53 a través de complejos asociados a fosfatasas, influyendo en decisiones dependientes de la fosforilación durante las respuestas al daño del ADN. Mediante estas funciones, afecta a la proliferación, la estabilidad genómica y los programas de señalización relacionados con la apoptosis. Se ha observado una expresión desregulada de CCNG1 o una dependencia del contexto de la vía de p53 en múltiples tipos de cáncer, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar las respuestas al estrés oncogénico y la aptitud de las células tumorales.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO cyclin G1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CCNG1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CCNG1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CCNG1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína cyclin G1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CCNG1 para la investigación de la señalización de cyclin G1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de CCNG1 críticos para la función de cyclin G1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CCNG1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido cyclin G1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido cyclin G1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CCNG1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR cyclin G1 (h) y el plásmido HDR cyclin G1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CCNG1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CCNG1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.