cyclin D1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400047

概要

CCND1はサイクリンD1をコードしており、G1/S期の細胞周期移行を制御する中核因子です。サイクリンD1はCDK4/6を活性化してRBファミリータンパク質をリン酸化し、E2F依存性転写を促進します。さらにサイクリンD1は、RTK–RAS–MAPKやPI3K–AKTなどの経路の下流で増殖因子刺激や栄養シグナルを統合し、増殖を成長制御やチェックポイントの健全性と協調させます。CCND1の発現異常やコピー数増加は、異常な細胞周期への侵入やゲノム不安定性としばしば関連しており、腫瘍形成やがん遺伝子シグナル伝達ネットワークの研究で共通して注目される分子学的特徴となっています。

cyclin D1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCCND1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CCND1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CCND1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、cyclin D1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、cyclin D1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CCND1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• cyclin D1の機能に不可欠なCCND1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CCND1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• cyclin D1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびcyclin D1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CCND1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  cyclin D1 HDRプラスミド（h）および cyclin D1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCCND1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCCND1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。