CUL-4A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-430261

Descripción general

El gen Cul4a de ratón codifica CUL-4A, una proteína andamiaje de la familia cullina que ensambla complejos de ligasa E3 de ubiquitina CUL4–DDB1 para dirigir la ubiquitinación y la degradación proteasomal de reguladores clave de la dinámica de la cromatina y la estabilidad del genoma. CUL-4A participa en el reconocimiento del daño en el ADN y en la señalización de reparación, incluida la reparación por escisión de nucleótidos y procesos asociados a la replicación, y ayuda a coordinar la progresión del ciclo celular mediante degradación proteica regulada. Al modular la proteostasis en la cromatina, CUL-4A influye en programas de transcripción y en respuestas de puntos de control bajo estrés genotóxico. La ubiquitinación dependiente de CUL4A desregulada se ha vinculado a fenotipos de proliferación aberrante e inestabilidad genómica, lo que convierte a Cul4a en una diana útil para estudios mecanísticos de vías oncogénicas en modelos murinos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CUL-4A (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Cul4a en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Cul4a junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Cul4a tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CUL-4A.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Cul4a para la investigación de la señalización de CUL-4A, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Cul4a críticos para la función de CUL-4A
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Cul4a para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CUL-4A CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido CUL-4A CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Cul4a. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CUL-4A (m) y el plásmido HDR CUL-4A (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Cul4a para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Cul4a definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.