CTNNBL1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-409293-ACT

CTNNBL1 (catenin beta like 1) kodiert ein nukleäres Armadillo-Repeat-Protein, das mit Komponenten des Spleißosoms assoziiert ist und an der Regulation der Prä‑mRNA‑Prozessierung sowie von Netzwerken RNA-bindender Proteine beteiligt sein soll. Funktionelle Studien bringen CTNNBL1 mit der Koordination von Genexpressionsprogrammen in Verbindung, die den Zellzyklusverlauf, DNA-Schadensantworten und die Aufrechterhaltung der nukleären Organisation beeinflussen. Eine veränderte CTNNBL1-Expression wurde in transkriptomischen Krebsdatensätzen sowie in genetischen Studien zu immunbezogenen Phänotypen beobachtet, was seine Relevanz für eine gestörte Kopplung von Transkription und Spleißen untermauert. Daher ist CTNNBL1 von Interesse, um zu untersuchen, wie nukleäre Proteinkomplexe die RNA-Reifung und nachgeschaltete Signalwege in menschlichen Zellen modulieren.

CTNNBL1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CTNNBL1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CTNNBL1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CTNNBL1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CTNNBL1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CTNNBL1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CTNNBL1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CTNNBL1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CTNNBL1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CTNNBL1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.