Plasmide CRISPR/Cas9 KO CTMP (m): sc-429205

Présentation

Them4 code CTMP (carboxyl-terminal modulator protein), un régulateur associé à la membrane surtout connu pour moduler la signalisation AKT/PKB. CTMP peut se lier à AKT et influencer son état de phosphorylation, reliant ainsi Them4 au contrôle, par la voie PI3K–AKT, de la survie cellulaire, du métabolisme et des réponses au stress. Dans des systèmes murins, une activité CTMP altérée a été associée à des modifications de la fonction mitochondriale, de la gestion du stress oxydant et de processus liés à l’apoptose. Comme la signalisation PI3K–AKT est largement impliquée dans des phénotypes inflammatoires, métaboliques et neurodégénératifs, Them4 est fréquemment étudié comme un nœud reliant la dynamique de signalisation à des états cellulaires pertinents pour la maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CTMP (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Them4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Them4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Them4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CTMP.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Them4 pour l'étude de la signalisation de CTMP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Them4 essentiels à la fonction de CTMP
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Them4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CTMP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le CTMP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Them4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CTMP plasmide HDR (m) et le CTMP (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Them4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Them4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.