Plasmide CRISPR/Cas9 KO CSP (h): sc-403622
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- CSP Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique CSP, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CSP Antibody (H-3): sc-137128
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO CSP (h) | sc-403622 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
DNAJC5 code la cysteine string protein (CSP), une co‑chaperonne à domaine J palmitoylée, enrichie sur les vésicules synaptiques, où elle coordonne le contrôle qualité des protéines dépendant de Hsc70 au niveau des terminaisons présynaptiques. La CSP favorise une exocytose efficace des vésicules synaptiques en stabilisant des composants de la machinerie SNARE ainsi que d’autres protéines du trafic vésiculaire, contribuant ainsi au maintien de la neurotransmission lors d’une forte activité. Par ses rôles dans la protéostasie médiée par des chaperonnes, le trafic membranaire et l’homéostasie synaptique, une altération de la fonction de DNAJC5/CSP est associée à des phénotypes neurodégénératifs et à une vulnérabilité neuronale dans des troubles caractérisés par un défaut de maintenance synaptique.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CSP (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DNAJC5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DNAJC5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DNAJC5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CSP.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DNAJC5 pour l'étude de la signalisation de CSP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de DNAJC5 essentiels à la fonction de CSP
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DNAJC5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le CSP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CSP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DNAJC5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le CSP plasmide HDR (h) et le CSP (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DNAJC5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DNAJC5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.