Csk CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419846

Übersicht

Csk (C-terminale Src-Kinase) ist eine zytosolische Tyrosinkinase, die das C-terminale regulatorische Tyrosin von Src-Familien-Kinasen phosphoryliert, dadurch eine autoinhibierte Konformation erzwingt und nachgeschaltete Signalübertragung dämpft. Durch die Feinabstimmung Src-abhängiger Signalwege beeinflusst Csk in vielen Zelltypen rezeptornahe Signalprozesse, die Dynamik fokaler Adhäsionen, die Umgestaltung des Zytoskeletts sowie die Signal-Schwellen von Immunrezeptoren. In Mausmodellen stört eine veränderte Csk-Aktivität die Aktivierung und Toleranz von Lymphozyten und beeinflusst Prozesse, die mit Entzündung und onkogener Signalgebung in Zusammenhang stehen, indem Src-Kinasen aberrant aktiviert werden. Daher wird Csk umfassend als zentraler negativer Regulator untersucht, der Wachstumsfaktor- und Immunsignale mit Programmen der Zelladhäsion, Migration und Proliferation verknüpft.

Das Csk CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Csk-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Csk-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Csk nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Csk-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Csk-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Csk-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Csk-Exone abzielen, die für die Csk-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Csk-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Csk CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Csk CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Csk-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Csk HDR-Plasmid (m) und Csk HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Csk-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Csk-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.