cSHMT CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403678-ACT

ヒトSHMT1は、細胞質セリンヒドロキシメチルトランスフェラーゼ（cSHMT）をコードしている。cSHMTはピリドキサールリン酸（PLP）依存性酵素であり、セリンをグリシンへ可逆的に変換すると同時に、ワンカーボン代謝のための5,10-メチレンテトラヒドロ葉酸を生成する。cSHMTは、チミジル酸およびプリン合成に必要な一炭素単位を供給し、さらにレドックス感受性の代謝フラックスを調整することで、葉酸依存性のヌクレオチド生合成とメチル化能を結び付けている。葉酸／ワンカーボン経路における役割を通じて、SHMT1はDNA複製・修復の忠実性、エピジェネティック制御、ならびに栄養利用性に対する細胞応答に影響する。この軸の破綻は、増殖ストレスや代謝リプログラミングのモデルでしばしば検討されており、ゲノム安定性に関連する疾患表現型への関与が示唆されている。

cSHMT CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SHMT1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

cSHMT CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SHMT1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSHMT1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性cSHMTの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSHMT1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるcSHMT依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSHMT1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるcSHMT経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。