Plasmide CRISPR/Cas9 KO CRMP-3 (h): sc-404504

Présentation

DPYSL4 code pour la protéine médiatrice de la réponse au collapsine 3 (CRMP-3), une phosphoprotéine cytosolique de la famille des CRMP qui relie des signaux de guidage extracellulaires à la dynamique des microtubules et au remodelage du cytosquelette. CRMP-3 a été impliquée dans la croissance des neurites, le guidage axonal et la régulation de la morphologie cellulaire via des voies de signalisation en aval des sémaphorines et de kinases apparentées, qui modulent les états de phosphorylation des CRMP. Au-delà des contextes neuronaux, l’expression de DPYSL4 a été associée à des programmes d’adaptation au stress et à une reprogrammation métabolique, la reliant à des processus tels que la fonction mitochondriale, la motilité et la survie cellulaire. Une dérégulation de la signalisation DPYSL4/CRMP-3 a été rapportée dans des études sur des troubles neurologiques et des phénotypes associés au cancer, ce qui étaye son intérêt en tant que cible mécanistique pour l’étude des voies de signalisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CRMP-3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DPYSL4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DPYSL4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DPYSL4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CRMP-3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DPYSL4 pour l'étude de la signalisation de CRMP-3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DPYSL4 essentiels à la fonction de CRMP-3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DPYSL4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CRMP-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CRMP-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DPYSL4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CRMP-3 plasmide HDR (h) et le CRMP-3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DPYSL4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DPYSL4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.