Plasmide CRISPR/Cas9 KO CRM1 (h2): sc-400348-KO-2

Présentation

XPO1 code pour le récepteur d’export nucléaire CRM1, une protéine de la famille des karyophérines-β qui reconnaît les signaux d’export nucléaire riches en leucine et assure, de manière dépendante de RanGTP, le transport de protéines et de certains ARN sélectionnés du noyau vers le cytoplasme. En contrôlant le trafic nucléocytoplasmique, CRM1 régule la progression du cycle cellulaire, les réponses au stress et les programmes transcriptionnels via la localisation de cargos tels que des suppresseurs de tumeurs, des facteurs de transcription et des complexes ribonucléoprotéiques. La fonction de CRM1 s’intègre au cycle de la GTPase Ran et à la dynamique du complexe du pore nucléaire afin de maintenir une signalisation compartimentée et la protéostasie. Une activité XPO1/CRM1 dérégulée et une distribution altérée des cargos sont fréquemment étudiées en cancérologie, dans les réponses antivirales et dans les mécanismes neurodégénératifs, lorsque le transport noyau–cytoplasme est perturbé.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CRM1 (h2) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène XPO1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du XPO1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert XPO1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CRM1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en XPO1 pour l'étude de la signalisation de CRM1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de XPO1 essentiels à la fonction de CRM1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de XPO1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CRM1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CRM1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus XPO1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CRM1 plasmide HDR (h) et le CRM1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie XPO1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles XPO1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.