CRIM1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404886-ACT

CRIM1 (regulador transmembranar rico em cisteína de BMP 1) codifica uma proteína transmembranar que modula a sinalização extracelular ao se ligar e apresentar fatores de crescimento, particularmente em redes de BMP/TGF-β. Contribui para o padrão de desenvolvimento, para interações célula–célula e célula–matriz e para a regulação do comportamento endotelial e epitelial por meio do controle da disponibilidade de morfógenos e do engajamento de receptores. A atividade de CRIM1 tem sido associada a processos como angiogênese, morfogênese de órgãos e homeostase tecidual, nos quais alterações na expressão podem deslocar programas de diferenciação e remodelamento. A desregulação de CRIM1 foi relatada em contextos de anomalias do desenvolvimento e fenótipos associados ao câncer, sustentando seu uso como um ponto central para estudar o equilíbrio da sinalização por fatores de crescimento e o controle do microambiente.

CRIM1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CRIM1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CRIM1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CRIM1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CRIM1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CRIM1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CRIM1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CRIM1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CRIM1 em células tumorais com expressão de CRIM1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.