creatine kinase-M CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2): sc-401132-KO-2

Übersicht

CKM kodiert Kreatinkinase M (CK‑M), eine zytosolische Phosphotransferase, die die reversible Übertragung einer Phosphatgruppe von Phosphokreatin auf ADP katalysiert, um ATP zu regenerieren, und dadurch bei schwankendem Bedarf die zelluläre Energiecharge puffert. CK‑M ist stark in Skelett- und Herzmuskel angereichert und unterstützt die ATP‑Homöostase in Kopplung an Glykolyse, oxidative Phosphorylierung sowie den durch den Phosphokreatin‑Shuttle vermittelten Energietransport in Muskelfasern. Eine Störung der CKM‑Aktivität beeinflusst die Muskelkontraktilität und metabolische Stressantworten und wird häufig in Studien zu Myopathien, Muskelverletzungen und kardiometabolischem Remodeling untersucht. CKM dient zudem als mechanistischer Knotenpunkt zur Untersuchung energetischer Anpassung, mitochondrialer Funktion und redoxgekoppelter Signalwege in Modellen quergestreifter Muskulatur.

Das creatine kinase-M CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CKM-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CKM-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CKM nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die creatine kinase-M-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CKM-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der creatine kinase-M-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CKM-Exone abzielen, die für die creatine kinase-M-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CKM-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom creatine kinase-M CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom creatine kinase-M CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CKM-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das creatine kinase-M HDR-Plasmid (h) und creatine kinase-M HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CKM-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CKM-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.