CPT1-C Double Nickaseプラスミド (h): sc-402510-NIC

カルニチン・パルミトイルトランスフェラーゼ1C（CPT1C）は、CPT1-Cをコードする遺伝子であり、脳で高発現しミトコンドリアに関連する、CPT1ファミリーの相同酵素です。CPT1-Cは、典型的なβ酸化フラックスというよりも、長鎖脂肪酸の取り扱いや脂質センシングに関わる過程の調節に関与すると考えられています。CPT1-Cは、神経細胞のエネルギー恒常性、ミトコンドリア機能、栄養利用可能性に応じた適応応答と関連しており、これらは脂肪酸代謝および細胞ストレス経路と交差します。CPT1Cの発現変化は、複数の腫瘍の文脈や神経疾患モデルで報告されており、脂質代謝のリプログラミングやミトコンドリア制御が、細胞の生存、シグナル伝達、分化にどのように影響するかを検討する意義を支持しています。そのためCPT1-Cは、ヒト細胞における代謝適応、レドックスバランス、増殖に関連するバイオエナジェティクスへの寄与という観点から、一般に研究対象となっています。

CPT1-C ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CPT1C 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CPT1C内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CPT1Cの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CPT1Cが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。