COX5b Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405159

Descripción general

COX5B codifica la subunidad 5B de la citocromo c oxidasa (COX5b), un componente del complejo IV mitocondrial codificado en el núcleo que favorece la transferencia de electrones desde el citocromo c al oxígeno molecular y contribuye al bombeo de protones a través de la membrana interna mitocondrial. Al modular la eficiencia de la fosforilación oxidativa, COX5b influye en la producción celular de ATP, el equilibrio redox y el potencial de membrana mitocondrial, integrándose con vías que coordinan la biogénesis mitocondrial y las respuestas al estrés. Las alteraciones en la función del complejo IV y en la expresión de COX5B se estudian con frecuencia en contextos de disfunción mitocondrial, incluido el remodelado bioenergético en la neurodegeneración, los trastornos cardiometabólicos y el metabolismo tumoral. COX5B también se utiliza como gen marcador en investigaciones sobre el ensamblaje de la cadena respiratoria, la señalización por especies reactivas de oxígeno y la comunicación cruzada mitocondria–núcleo.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO COX5b (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen COX5B en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del COX5B junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de COX5B tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína COX5b.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en COX5B para la investigación de la señalización de COX5b, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de COX5B críticos para la función de COX5b
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de COX5B para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido COX5b CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido COX5b CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus COX5B. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR COX5b (h) y el plásmido HDR COX5b (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología COX5B para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana COX5B definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.