COPG CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404407

Übersicht

COPG1 kodiert die Gamma‑Untereinheit des Coatomer‑Proteinkomplexes I (COPI), eines zytosolischen Mantelkomplexes, der die Vesikelknospung und die Frachtauswahl beim retrograden Transport vom Golgi zum endoplasmatischen Retikulum sowie innerhalb der Golgi-Zisternen vermittelt. COPG wirkt zusammen mit anderen COPI‑Untereinheiten an der Mantelassemblierung mit, um den Membrantransport, die Organisation des Golgi und die Rückführung ER‑residenter Proteine über Sortiersignale zu regulieren und so die Proteinreifung und die Homöostase des sekretorischen Weges zu unterstützen. Störungen des COPI‑abhängigen Transports können ER‑Stressantworten, Glykosylierung und Proteostase beeinträchtigen und verknüpfen die Funktion von COPG1 mit Signalwegen, die für Zellwachstum, Differenzierung und Stressanpassung relevant sind. Veränderte Sekretions- und Transportprogramme werden häufig von proliferativen und immunassoziierten Krankheitszuständen genutzt, wodurch COPG1 ein geeigneter Ansatzpunkt für mechanistische Studien zu Membrantransport und Organellendynamik ist.

Das COPG CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des COPG1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des COPG1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von COPG1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die COPG-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von COPG1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der COPG-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf COPG1-Exone abzielen, die für die COPG-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere COPG1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom COPG CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom COPG CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des COPG1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das COPG HDR-Plasmid (h) und COPG HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von COPG1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten COPG1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.