connexin 40 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401031

概要

GJA5はコネキシン40（Cx40）をコードしており、Cx40はギャップ結合タンパク質として細胞間チャネルを形成し、隣接する細胞同士でイオンや小分子代謝産物を直接通過させます。Cx40を介した細胞間結合は、特に心房および特殊刺激伝導系において、迅速な電気伝導と協調的なシグナル伝達を支えるほか、血管緊張やリモデリングを左右する内皮細胞間コミュニケーションにも寄与します。細胞間接続性と興奮伝播の制御を通じて、GJA5機能の変化は心房内伝導異常などの不整脈関連表現型と関連づけられており、先天性心疾患や血管調節異常との関連でも研究されています。

connexin 40 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるGJA5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、GJA5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、GJA5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、connexin 40タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、connexin 40シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、GJA5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• connexin 40の機能に不可欠なGJA5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、GJA5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• connexin 40 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびconnexin 40 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、GJA5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  connexin 40 HDRプラスミド（h）および connexin 40 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGJA5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGJA5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。