Plásmido Doble Nickase (h) connexin 32: sc-402378-NIC

GJB1 codifica la conexina 32 (Cx32), una proteína de canales de uniones gap que forma conductos intercelulares para iones y pequeños metabolitos, lo que permite el acoplamiento eléctrico y metabólico entre células vecinas. La Cx32 es destacada en las células de Schwann mielinizantes y en otros tejidos epiteliales, donde contribuye a la homeostasis tisular al coordinar la señalización, el equilibrio redox y las respuestas al daño. Mediante la regulación de la comunicación intercelular a través de uniones gap, la conexina 32 influye en procesos como la excitabilidad de membrana, la diferenciación celular y las vías de señalización asociadas al estrés. Las alteraciones genéticas en GJB1 se asocian fuertemente con neuropatías periféricas hereditarias, lo que lo convierte en un objetivo clave para estudios mecanísticos sobre el mantenimiento de la mielina y los defectos de comunicación célula–célula.

connexin 32 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GJB1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GJB1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GJB1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GJB1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.