connexin 30.3 Plasmide Double Nickase (h): sc-409363-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- connexin 30.3 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il connexin 30.3 Double Nickase Plasmid (h) e il connexin 30.3 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GJB4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: connexin 30.3 Antibody (F6): sc-81802
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
connexin 30.3 Plasmide Double Nickase (h) | sc-409363-NIC | 20 µg | $410.00 |
GJB4 codifica la connessina 30.3, una subunità dei canali delle gap junction che si assembla in connessoni per mediare lo scambio intercellulare diretto di ioni e piccoli metaboliti. Attraverso queste giunzioni, la connessina 30.3 contribuisce al coordinamento a livello tissutale del potenziale di membrana, della segnalazione del calcio e dell’accoppiamento metabolico, sostenendo la differenziazione epiteliale e l’omeostasi. Nell’epidermide, la comunicazione mediata dalle connessine si interseca con i percorsi coinvolti nella proliferazione dei cheratinociti e nel mantenimento della barriera cutanea. Una funzione deregolata di GJB4 e un’alterata connettività delle gap junction sono state associate a patologie cutanee ereditarie caratterizzate da cornificazione anomala e da una compromessa integrità epiteliale.
connexin 30.3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GJB4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GJB4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GJB4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GJB4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.