Complexin-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406799

Übersicht

CPLX2 kodiert Complexin-2, ein präsynaptisches zytosolisches Protein, das an assemblierte SNARE-Komplexe bindet, um das Priming synaptischer Vesikel und die calciumgetriggerte Exozytose zu regulieren. Durch die Modulation der Vesikelfusionswahrscheinlichkeit und der synchronen Neurotransmitterfreisetzung trägt Complexin-2 zur aktivitätsabhängigen Neurotransmission und zur kurzzeitigen synaptischen Plastizität bei. Eine mit CPLX2 verknüpfte Dysfunktion wurde im Zusammenhang mit einer veränderten exzitatorischen/inhibitorischen Balance und schaltkreisbezogenen Phänotypen untersucht, die für neuropsychiatrische und neuroentwicklungsbedingte Erkrankungen relevant sind, ebenso wie mit synaptischen Veränderungen im Kontext neurodegenerativer Prozesse. Diese Eigenschaften machen CPLX2 zu einem nützlichen Knotenpunkt, um SNARE-vermittelte Membranfusion, Ca2+-abhängige Signalübertragung und die Kontrolle des präsynaptischen Vesikelzyklus in humanen Zellmodellen zu untersuchen.

Das Complexin-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CPLX2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CPLX2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CPLX2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Complexin-2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CPLX2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Complexin-2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CPLX2-Exone abzielen, die für die Complexin-2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CPLX2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Complexin-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Complexin-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CPLX2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Complexin-2 HDR-Plasmid (h) und Complexin-2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CPLX2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CPLX2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.