COL6A2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403209

Descripción general

COL6A2 codifica la cadena α2 del colágeno VI, un componente microfibrilar de la matriz extracelular (MEC) que se ensambla con COL6A1 y COL6A3 para formar filamentos con aspecto de “cuentas” en los tejidos conectivos. El colágeno VI contribuye a la organización de la MEC, a la adhesión célula–matriz y a la mecanotransducción, influyendo en la arquitectura del citoesqueleto y en vías de señalización como los programas de remodelación asociados a integrina/FAK, MAPK y TGF-β. A través de estos procesos, COL6A2 ayuda a regular la integridad tisular y las respuestas al estrés celular en fibroblastos, miocitos y otros tipos de células estromales. La alteración patogénica del ensamblaje del colágeno VI se asocia con trastornos neuromusculares y del tejido conectivo hereditarios, lo que convierte a COL6A2 en un objetivo relevante para modelar fenotipos impulsados por la MEC.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO COL6A2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen COL6A2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del COL6A2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de COL6A2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína COL6A2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en COL6A2 para la investigación de la señalización de COL6A2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de COL6A2 críticos para la función de COL6A2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de COL6A2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido COL6A2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido COL6A2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus COL6A2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR COL6A2 (h) y el plásmido HDR COL6A2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología COL6A2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana COL6A2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.