COL4A3 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-419745-ACT

Das murine Gen **Col4a3** kodiert die α3‑Kette des Kollagen Typ IV (COL4A3), eine zentrale strukturelle Komponente der Basalmembranen, die sich zum heterotrimeren Netzwerk **α3α4α5(IV)** assemblieren lässt. Dieses Gerüst der extrazellulären Matrix gewährleistet die Integrität der glomerulären und tubulären Basalmembran, beeinflusst Zell‑Matrix‑Adhäsion und Mechanotransduktion und prägt die Gewebearchitektur durch Interaktionen mit Lamininen, Integrinen und Enzymen des Matrix‑Remodelings. COL4A3 ist eng mit Signalwegen der Basalmembranorganisation und der Homöostase der extrazellulären Matrix verknüpft, die für die Funktion der renalen Filtrationsbarriere wichtig sind. Eine Dysregulation oder genetische Störung von **Col4a3** wird широко eingesetzt, um erbliche Basalmembranerkrankungen mit progredienter Nierenpathologie sowie damit verbundenen Remodeling‑Phänotypen in vivo und in Organoid‑Systemen zu modellieren.

COL4A3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Col4a3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

COL4A3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Col4a3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Col4a3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen COL4A3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Col4a3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von COL4A3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des COL4A3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Col4a3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.