CNOT6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406273
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- CNOT6 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im CNOT6-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CNOT6: sc-81231
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CNOT6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) | sc-406273 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
CNOT6 (CCR4-NOT-Transkriptionskomplex-Untereinheit 6) ist eine katalytisch aktive Deadenylase innerhalb des CCR4–NOT-Komplexes, die Poly(A)-Schwänze von mRNAs verkürzt, um den Transkriptabbau einzuleiten und die Translation feinzujustieren. Durch die Regulation der mRNA-Stabilität trägt CNOT6 zur posttranskriptionellen Genkontrolle in Signalwegen bei, die Zellzyklusprogression, Stressantworten, Differenzierung und angeborene Immun-Signalübertragung steuern. Seine Aktivität steht in Wechselwirkung mit der miRNA-vermittelten Silenzierung und umfassenderen RNA-Überwachungsnetzwerken und prägt so die Dynamik des Transkriptoms als Reaktion auf zelluläre Signale. Eine Fehlregulation der CCR4–NOT-abhängigen Deadenylierung, einschließlich veränderter CNOT6-Funktion oder -Expression, wurde mit aberranten Genexpressionsprogrammen in Verbindung gebracht, die für die Krebsbiologie und immunbezogene Phänotypen relevant sind.
Das CNOT6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CNOT6-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CNOT6-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CNOT6 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CNOT6-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CNOT6-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CNOT6-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf CNOT6-Exone abzielen, die für die CNOT6-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere CNOT6-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom CNOT6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CNOT6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CNOT6-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CNOT6 HDR-Plasmid (h) und CNOT6 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CNOT6-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CNOT6-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.