CMTM4 Plasmide Double Nickase (m): sc-430183-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CMTM4 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CMTM4 Double Nickase Plasmid (m) e il CMTM4 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Cmtm4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CMTM4 Antibody (1E8): sc-81942
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CMTM4 Plasmide Double Nickase (m) | sc-430183-NIC | 20 µg | $410.00 |
Cmtm4 codifica CMTM4, una proteina transmembrana della famiglia MARVEL simile a CKLF, implicata nell’organizzazione delle membrane e nel traffico vescicolare. CMTM4 partecipa ai processi di smistamento endosomiale che influenzano la stabilità e la disponibilità sulla superficie di proteine immunoregolatorie chiave, tra cui PD-L1, contribuendo così a modulare la segnalazione cellula–cellula e le vie immuno-correlate. Nei modelli murini, CMTM4 viene studiata nel contesto della biologia delle cellule epiteliali e immunitarie, dove alterazioni possono influenzare proliferazione, differenziamento e risposte infiammatorie. Una deregolazione del traffico e della segnalazione associati a CMTM4 è stata collegata a meccanismi rilevanti per l’immunologia tumorale e per altre patologie in cui è alterato il turnover delle proteine di membrana.
CMTM4 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Cmtm4 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Cmtm4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Cmtm4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Cmtm4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.