Clusterin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419695

Übersicht

Mouse Clu kodiert Clusterin, ein sezerniertes und mit der extrazellulären Matrix assoziiertes Glykoprotein, das als molekulares Chaperon und lipidbindender Faktor wirkt und an Proteostase, Komplementregulation sowie der Beseitigung zellulärer Trümmer beteiligt ist. Clusterin ist an stressresponsiven Prozessen beteiligt, darunter die Modulation der Apoptose, die Anpassung an oxidativen Stress und Membranumbau, und wurde mit Signalwegen in Verbindung gebracht, die Entzündung und extrazelluläre Homöostase steuern. Im Nervensystem und anderen Geweben wird CLU häufig im Hinblick auf seine Rolle bei der Dynamik von Proteinaggregation sowie bei glialer oder immunologischer Signalübertragung untersucht. Eine fehlregulierte CLU-Expression oder -Funktion wird mit Neurodegeneration, metabolischem Stress und Tumorbiologie assoziiert und macht CLU zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien zu Gewebeschädigung und chronischen Entzündungszuständen.

Das Clusterin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Clu-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Clu-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Clu nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Clusterin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Clu-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Clusterin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Clu-Exone abzielen, die für die Clusterin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Clu-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Clusterin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Clusterin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Clu-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Clusterin HDR-Plasmid (m) und Clusterin HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Clu-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Clu-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.