CLN5 Double Nickase Plasmid (h): sc-408473-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CLN5 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CLN5 Double-Nickase-Plasmid (h) und CLN5 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CLN5 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CLN5: sc-374672
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CLN5 Double Nickase Plasmid (h) | sc-408473-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CLN5 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-408473-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CLN5 kodiert ein lösliches lysosomales Glykoprotein, das an endolysosomalem Transport und Proteostase beteiligt ist und damit die ordnungsgemäße Funktion der Lysosomen sowie den Abbau und Umsatz zellulärer Makromoleküle unterstützt. Die CLN5-Aktivität ist mit lysosomenbezogenen Signal- und Prozesswegen verknüpft, darunter Autophagie-Lysosomen-Flux, Vesikeltransport und die Aufrechterhaltung der neuronalen Homöostase. Loss-of-Function-Varianten in CLN5 sind mit der neuronalen Ceroid-Lipofuszinose assoziiert, die durch lysosomale Speicherpathologie und progressive Neurodegeneration gekennzeichnet ist, wodurch CLN5 ein zentrales Ziel für die Untersuchung von Mechanismen lysosomaler Dysfunktion darstellt. In humanen Zellmodellen wird die Störung von CLN5 häufig genutzt, um die Prozessierung lysosomaler Enzyme, die Sortierung von Fracht (Cargo) und die Anreicherung von Speichermaterial zu untersuchen.
CLN5 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CLN5-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CLN5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CLN5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CLN5-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.