Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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CLN2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405204
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- CLN2 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico CLN2, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CLN2 Anticuerpo (G-3): sc-393961
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
CLN2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-405204 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
TPP1 codifica la tripeptidil peptidasa 1 (CLN2), una proteasa lisosomal de serina que elimina tripéptidos de los extremos N-terminales de los polipéptidos durante el recambio proteico intralisosomal. La actividad de CLN2 sustenta procesos catabólicos dependientes del lisosoma que se solapan con el flujo autófago–lisosomal, el tráfico endolisosomal y el mantenimiento de la proteostasis en tipos celulares metabólicamente activos. La pérdida de función de TPP1 altera la proteólisis lisosomal y contribuye a la vulnerabilidad neuronal; se han vinculado variantes patogénicas con la lipofuscinosis ceroidea neuronal relacionada con CLN2 y con una patología más amplia de almacenamiento lisosomal. En consecuencia, TPP1/CLN2 se estudia ampliamente en modelos de función lisosomal, respuestas al estrés y mecanismos que acoplan la degradación alterada a la disfunción celular.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO CLN2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TPP1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TPP1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TPP1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CLN2.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TPP1 para la investigación de la señalización de CLN2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de TPP1 críticos para la función de CLN2
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TPP1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido CLN2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CLN2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TPP1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CLN2 (h) y el plásmido HDR CLN2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TPP1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TPP1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.