CLC-5 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-404859-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- CLC-5O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase CLC-5 (h) e o Plasmídeo Double Nickase CLC-5 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para CLCN5. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
CLC-5 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-404859-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CLC-5 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-404859-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O CLCN5 humano codifica o CLC-5, um trocador endossomal de Cl⁻/H⁺ dependente de voltagem que sustenta a acidificação vesicular e a condução de cloreto necessárias para a endocitose mediada por receptores e o tráfego de proteínas de membrana. O CLC-5 localiza-se predominantemente em endossomos precoces em células epiteliais polarizadas, onde se acopla funcionalmente à atividade da V-ATPase para regular o pH luminal, a triagem de cargas e a reciclagem. A disrupção de CLCN5 perturba vias de reabsorção no túbulo proximal e a homeostase endolisossomal, estando associada a disfunções tubulares renais hereditárias, como a doença de Dent. Como resultado, o CLC-5 é frequentemente estudado na biologia do transporte epitelial, na regulação da via endocítica e nos mecanismos que ligam o manuseio iônico endossomal à captação e degradação de proteínas.
CLC-5 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus CLCN5 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de CLCN5. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função CLCN5. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com CLCN5 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.