claudin-6 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403405-ACT

CLDN6は、上皮バリアの形成、頂端—基底極性、および傍細胞経路の選択的透過性に寄与する、4回膜貫通型のタイトジャンクションタンパク質であるクラウディン6をコードします。CLDN6は、他のクラウディンやTJP1/ZO-1などの足場タンパク質とともにタイトジャンクション複合体を構成することで、細胞—細胞接着と接合部シグナル伝達の協調に関与し、分化プログラムや上皮形態形成と連動します。CLDN6の発現変化は、複数のがんの文脈や発生モデルで報告されており、タイトジャンクションの完全性が破綻すると、浸潤や転移に関連する表現型、上皮の可塑性に影響し得ます。そのためCLDN6は、ヒト上皮系における接合部リモデリングや系譜状態の移行のマーカー、ならびに機能的制御因子として頻繁に研究されています。

claudin-6 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CLDN6の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

claudin-6 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CLDN6 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCLDN6転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性claudin-6の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCLDN6遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるclaudin-6依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCLDN6発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるclaudin-6経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。