Plasmide CRISPR/Cas9 KO claudin-18 (h): sc-404431

Présentation

CLDN18 code la claudine‑18, une protéine tétraspan des jonctions serrées qui contribue à la fonction de barrière paracellulaire et à la polarité épithéliale dans des contextes spécifiques aux tissus, notamment au niveau des épithéliums gastrique et pulmonaire. En organisant les brins de jonctions serrées avec d’autres claudines et des protéines d’échafaudage telles que des membres de la famille ZO, la claudine‑18 contribue à réguler l’intégrité des jonctions, la sélectivité ionique et des voies de signalisation liées à la dynamique du cytosquelette. Une expression altérée de CLDN18 ou une localisation jonctionnelle anormale est associée au remodelage épithélial et à une dérégulation de l’homéostasie de la barrière, des processus souvent liés à l’inflammation et à la biologie tumorale. CLDN18 a également été étudié dans le cadre d’événements de fusion et de programmes de lignée qui influencent l’adhésion cellulaire et les états de différenciation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO claudin-18 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CLDN18 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CLDN18, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CLDN18 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine claudin-18.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CLDN18 pour l'étude de la signalisation de claudin-18, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CLDN18 essentiels à la fonction de claudin-18
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CLDN18 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le claudin-18 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le claudin-18 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CLDN18. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le claudin-18 plasmide HDR (h) et le claudin-18 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CLDN18 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CLDN18 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.