Plasmide CRISPR/Cas9 KO CHSY3 (m): sc-429749

Présentation

Chsy3 code la chondroïtine sulfate synthase 3 (CHSY3), une glycosyltransférase résidente de l’appareil de Golgi qui participe à l’allongement des chaînes de glycosaminoglycanes de chondroïtine sulfate sur les protéoglycanes. Par coordination avec d’autres polymérases de la chondroïtine et des sulfotransférases, CHSY3 influence l’organisation de la matrice extracellulaire, la séquestration des facteurs de croissance et la signalisation cellule–matrice qui façonnent la morphogenèse et l’homéostasie tissulaires. Dans les systèmes murins, une composition altérée du chondroïtine sulfate peut affecter le développement du cartilage et du squelette, la plasticité neuronale et les microenvironnements inflammatoires en modulant des voies dépendantes des protéoglycanes. Ainsi, Chsy3 est pertinent pour les études mécanistiques du remodelage de la matrice extracellulaire et de la biologie des protéoglycanes dans des modèles de phénotypes musculosquelettiques et neurobiologiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CHSY3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Chsy3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Chsy3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Chsy3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CHSY3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Chsy3 pour l'étude de la signalisation de CHSY3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Chsy3 essentiels à la fonction de CHSY3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Chsy3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CHSY3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le CHSY3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Chsy3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CHSY3 plasmide HDR (m) et le CHSY3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Chsy3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Chsy3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.