CHP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406233

Übersicht

CHP1 kodiert das Calcineurin‑B‑homologe Protein (CHP), einen myristoylierten, EF‑Hand‑Ca2+-bindenden Regulator, der mit mehreren Membrantransportern und Signalproteinen assoziiert. CHP ist vor allem dafür bekannt, die Aktivität des Na+/H+-Austauschers zu modulieren und damit die intrazelluläre Ca2+-Dynamik mit der pH‑Homöostase, dem Ionentransport sowie der Kontrolle von Zellvolumen und Zytoskelettorganisation zu verknüpfen. Über diese Funktionen kann es Signalwege beeinflussen, die epitheliale Polarität, Proliferation und Stressantworten steuern. Eine fehlregulierte Ca2+-Signalübertragung und die durch CHP1 vermittelte Regulation von Austauschern wurden in Zusammenhängen wie dem Verhalten von Tumorzellen und anderen Erkrankungen untersucht, bei denen ein veränderter Ionenhaushalt und eine gestörte pH‑Regulation zur Pathophysiologie beitragen.

Das CHP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CHP1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CHP1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CHP1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CHP-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CHP1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CHP-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CHP1-Exone abzielen, die für die CHP-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CHP1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CHP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CHP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CHP1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CHP HDR-Plasmid (h) und CHP HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CHP1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CHP1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.