ChM-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403523-ACT

CNMD codifica a condromodulina-1 (ChM-1), uma proteína secretada associada à matriz extracelular, enriquecida na cartilagem avascular e implicada na manutenção do microambiente antiangiogênico de tecidos conjuntivos em desenvolvimento e maduros. A ChM-1 participa da regulação do comportamento de células endoteliais, da homeostase da cartilagem e do remodelamento da matriz extracelular, conectando-se a vias que coordenam a vascularização tecidual e a diferenciação condrogênica. Alterações na expressão de CNMD têm sido investigadas em contextos de degeneração da cartilagem e neovascularização aberrante, nos quais mudanças na sinalização da matriz podem influenciar respostas inflamatórias e à hipóxia. Como resultado, CNMD é amplamente estudado em biologia musculoesquelética, biologia vascular e pesquisa do microambiente tumoral como modulador da comunicação estroma-vascular.

ChM-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CNMD sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ChM-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CNMD em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CNMD, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ChM-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CNMD nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ChM-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ChM-1 em células tumorais com expressão de CNMD silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.