CEP350 Double Nickaseプラスミド (h): sc-406478-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- CEP350 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- CEP350ダブルニカースプラスミド（h）およびCEP350ダブルニカースプラスミド（h2）は、CEP350を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
CEP350 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-406478-NIC | 20 µg | $410.00 |
CEP350（centrosomal protein 350）は、大型のコイルドコイル構造をもつ中心体関連の足場（スキャフォールド）タンパク質で、主に中心体および母中心小体に局在し、微小管の核形成と固定（アンカリング）の組織化を助けます。CEP350は中心体因子やゴルジ体関連因子との相互作用を通じて、中心体の完全性、紡錘体の組織化、そして中心小体機能の正確さに依存する繊毛関連プロセスに寄与します。適切なCEP350活性は、中心体複製と有糸分裂期の微小管動態を協調させることで、細胞周期の進行とゲノム安定性を支えます。CEP350が関与する中心体構造や微小管組織の破綻は、染色体不安定性や繊毛病関連の細胞表現型の研究において重要な観点となります。
CEP350 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CEP350 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CEP350内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CEP350の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CEP350が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。