Plasmide CRISPR/Cas9 KO Cdk6 (h): sc-400309

Présentation

CDK6 code la kinase 6 dépendante des cyclines (Cdk6), une kinase sérine/thréonine qui s’associe aux cyclines de type D pour phosphoryler les protéines de la famille RB et favoriser la progression du cycle cellulaire de la phase G1 vers la phase S. L’activité de Cdk6 intègre les signaux mitogènes au contrôle des points de contrôle via l’axe cycline D–CDK4/6–RB–E2F et s’articule avec des voies régissant la prolifération, la différenciation et la sénescence. Une expression ou une signalisation de CDK6 dérégulée est fréquemment associée à un contrôle anormal du cycle cellulaire dans le cancer et est également impliquée dans les décisions de lignée hématopoïétique ainsi que dans des programmes transcriptionnels inflammatoires. En raison de son rôle central dans la coordination de l’entrée en cycle, CDK6 est largement étudié en biologie tumorale, dans la régulation des cellules souches/progénitrices et dans les mécanismes de résistance thérapeutique au niveau des voies de signalisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Cdk6 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CDK6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CDK6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CDK6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Cdk6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CDK6 pour l'étude de la signalisation de Cdk6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CDK6 essentiels à la fonction de Cdk6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CDK6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Cdk6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Cdk6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CDK6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Cdk6 plasmide HDR (h) et le Cdk6 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CDK6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CDK6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.