Cdk4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400148

Panoramica

CDK4 codifica la chinasi ciclina-dipendente 4 (Cdk4), un regolatore fondamentale della fase G1 che, in complesso con le cicline di tipo D, fosforila le proteine della famiglia RB e promuove la trascrizione dipendente da E2F necessaria per l’ingresso in fase S. L’attività di Cdk4 è controllata dai segnali mitogenici e dagli inibitori delle CDK, come CDKN2A/p16, integrando gli input delle vie MAPK/ERK e PI3K–AKT nella decisione d’impegno nel ciclo cellulare. La disregolazione dell’asse CDK4–ciclina D–RB è frequentemente associata a proliferazione anomala e a un controllo alterato dei checkpoint in contesti di biologia tumorale e dello sviluppo. In quanto chinasi nodale del ciclo cellulare, CDK4 viene studiata regolarmente per i suoi ruoli nella proliferazione, nella senescenza, nella specificazione di linea e nelle risposte allo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Cdk4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CDK4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CDK4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CDK4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Cdk4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CDK4 per lo studio della segnalazione di Cdk4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CDK4 critici per la funzione di Cdk4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CDK4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Cdk4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Cdk4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CDK4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Cdk4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Cdk4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CDK4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CDK4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.