Plásmido CRISPR de Activación (h) Cdc42EP4: sc-408523-ACT

CDC42EP4 codifica Cdc42EP4, un efector de Cdc42/Rho GTPasa que se une a las septinas y a la maquinaria asociada a la actina para coordinar la remodelación del citoesqueleto. Contribuye a la formación de fibras de estrés, a la dinámica de las adhesiones focales y a cambios en la forma celular que influyen en la migración y la adhesión a través de redes de señalización dependientes de las Rho GTPasas. Al modular la organización actomiosínica y los programas de polaridad celular, Cdc42EP4 es relevante para estudios de transiciones de tipo epitelio-mesénquima, comportamiento invasivo y respuestas al microambiente en células humanas. Se ha informado de una expresión alterada de CDC42EP4 en contextos de motilidad desregulada y control del citoesqueleto, lo que respalda su investigación en biología del cáncer, remodelación asociada a fibrosis y modelos de movimiento celular durante el desarrollo.

Cdc42EP4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CDC42EP4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Cdc42EP4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CDC42EP4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CDC42EP4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Cdc42EP4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CDC42EP4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Cdc42EP4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Cdc42EP4 en células tumorales con expresión de CDC42EP4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.