Cdc20 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400583

Panoramica

CDC20 codifica Cdc20, un co-attivatore essenziale del complesso promotore dell’anafase/ciclosoma (APC/C), che controlla la transizione da metafase ad anafase promuovendo la degradazione, dipendente dall’ubiquitina, di regolatori mitotici chiave. La sua attività è regolata dal checkpoint di assemblaggio del fuso tramite complessi inibitori con proteine quali MAD2 e BUBR1, garantendo una corretta segregazione dei cromosomi e una tempestiva uscita dalla mitosi. La disregolazione di CDC20 compromette la fedeltà del checkpoint, favorisce instabilità cromosomica e aneuploidia ed è frequentemente associata a fenotipi proliferativi nella biologia del cancro. In quanto nodo centrale nel controllo del ciclo cellulare, Cdc20 è comunemente studiato in vie che coinvolgono la segnalazione di APC/C, le dinamiche ubiquitina–proteasoma e il controllo del checkpoint mitotico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Cdc20 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CDC20 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CDC20 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CDC20 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Cdc20.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CDC20 per lo studio della segnalazione di Cdc20, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CDC20 critici per la funzione di Cdc20
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CDC20 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Cdc20 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Cdc20 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CDC20. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Cdc20 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Cdc20 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CDC20 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CDC20 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.