Plasmide CRISPR/Cas9 KO Cdc20 (h): sc-400583

Présentation

CDC20 code pour Cdc20, un coactivateur essentiel du complexe promoteur de l’anaphase/cyclosome (APC/C), qui contrôle la transition de la métaphase vers l’anaphase en favorisant la dégradation, dépendante de l’ubiquitine, de régulateurs mitotiques clés. Son activité est régulée par le point de contrôle d’assemblage du fuseau (spindle assembly checkpoint) via des complexes inhibiteurs avec des protéines telles que MAD2 et BUBR1, garantissant une ségrégation fidèle des chromosomes et une sortie de mitose au moment opportun. Une dérégulation de CDC20 perturbe la fiabilité du point de contrôle, favorise l’instabilité chromosomique et l’aneuploïdie, et est fréquemment associée à des phénotypes prolifératifs en cancérologie. En tant que nœud central de la régulation du cycle cellulaire, Cdc20 est couramment étudié dans des voies impliquant la signalisation de l’APC/C, la dynamique ubiquitine–protéasome et le contrôle du point de contrôle mitotique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Cdc20 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CDC20 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CDC20, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CDC20 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Cdc20.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CDC20 pour l'étude de la signalisation de Cdc20, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CDC20 essentiels à la fonction de Cdc20
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CDC20 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Cdc20 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Cdc20 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CDC20. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Cdc20 plasmide HDR (h) et le Cdc20 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CDC20 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CDC20 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.