CD9P-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404449

概要

PTGFRNはCD9P-1（EWI-Fとしても知られる）をコードしており、これはCD9/CD81との相互作用を介して膜ミクロドメインを組織化し、それらをアクチン細胞骨格に連結する、テトラスパニン関連の免疫グロブリンスーパーファミリータンパク質です。CD9P-1は、形質膜上でインテグリンおよびテトラスパニンが豊富な複合体を協調的に制御することにより、細胞接着、遊走、シグナル伝達の調節に寄与します。これらの過程は、細胞骨格リモデリング、細胞外マトリックスとの相互作用、ならびに小胞輸送を制御する経路と交差しており、侵襲性挙動や組織リモデリングの研究でしばしば検討されます。PTGFRN発現の変化やCD9P-1ネットワークの攪乱は複数の疾患関連状況で報告されており、がん細胞生物学や炎症関連表現型における機構研究の動機となっています。

CD9P-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPTGFRN遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PTGFRN内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PTGFRNのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CD9P-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CD9P-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PTGFRN欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CD9P-1の機能に不可欠なPTGFRNエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PTGFRNゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CD9P-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCD9P-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PTGFRN遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CD9P-1 HDRプラスミド（h）および CD9P-1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPTGFRNホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPTGFRN標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。