Plasmide Double Nickase (h) CD88: sc-401968-NIC

C5AR1 code CD88, un récepteur couplé aux protéines G à sept domaines transmembranaires qui se lie à l’anaphylatoxine du complément C5a et coordonne la chimiotaxie, la dégranulation, l’explosion oxydative et la libération de cytokines dans les cellules myéloïdes et d’autres types cellulaires immunoréactifs. La signalisation de CD88 active des voies dépendantes de Gαi, notamment PI3K–AKT, MAPK/ERK et la mobilisation du calcium, reliant l’activation du complément au trafic leucocytaire et aux programmes transcriptionnels inflammatoires. Par des interactions croisées avec la signalisation des récepteurs Toll-like et les voies des récepteurs Fc, C5AR1 influence l’amplification de l’immunité innée ainsi que les dynamiques de résolution. Une activité C5a–CD88 dérégulée a été impliquée dans des affections inflammatoires et à médiation immunitaire, et elle est fréquemment étudiée dans des modèles de lésion tissulaire, d’infection et d’inflammation associée aux tumeurs.

CD88 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus C5AR1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de C5AR1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de C5AR1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de C5AR1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.