CD68 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400211-ACT

CD68（別名マクロシアリン）は、強く糖鎖修飾されたリソソーム／エンドソーム膜タンパク質をコードする遺伝子で、単球、マクロファージ、ミクログリアに高発現しています。これらの細胞では、ファゴリソソーム量や骨髄系細胞の活性化状態を示すマーカーとして広く用いられています。CD68はエンドサイトーシス輸送や貪食に関連するプロセスに関与し、自然免疫シグナル伝達をリソソーム機能および抗原の取り扱い（処理・提示）と結び付けます。CD68の発現変動は、炎症性の組織リモデリング、代謝機能障害、神経炎症といった状況におけるマクロファージ／ミクログリアの活性化に伴って見られ、骨髄系の分化・活性化プログラムの変化を反映します。骨髄系細胞状態の指標として、CD68はサイトカイン、インターフェロン、脂質取り扱い経路などと併せて評価されることが多く、細胞表現型を免疫微小環境と関連付けるために用いられます。

CD68 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CD68の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CD68 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CD68 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCD68転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CD68の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCD68遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCD68依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCD68発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCD68経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。