CD47 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400508-ACT

ヒトCD47は、広く発現する細胞表面の免疫グロブリンスーパーファミリータンパク質をコードしており、「自己」認識シグナルおよび接着受容体として機能します。CD47は骨髄系細胞上のSIRPαと結合して貪食作用と免疫監視を調節するほか、トロンボスポンジン-1にも結合してインテグリンシグナル、細胞骨格ダイナミクス、細胞遊走に影響を与えます。これらの相互作用を通じて、CD47は白血球のトラフィッキング、血管・血小板の生物学、炎症応答の制御などの過程に関与します。CD47発現の異常は、腫瘍と免疫の相互作用の変化、造血器腫瘍、炎症性または線維化性の病態と関連づけられており、免疫回避や組織微小環境のリモデリングの機序研究において、しばしば標的として扱われています。

CD47 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CD47の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CD47 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CD47 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCD47転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CD47の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCD47遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCD47依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCD47発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCD47経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。