CD44 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400209-ACT

O CD44 humano codifica uma glicoproteína multifuncional de superfície celular que se liga ao hialuronano e a outros ligantes da matriz extracelular para regular a adesão celular, a migração e o homing (direcionamento) de linfócitos. O CD44 participa da remodelação do citoesqueleto e da transdução de sinais por meio de vias que envolvem proteínas ERM, GTPases da família Rho e crosstalk com receptores tirosina-quinase, moldando respostas a estímulos inflamatórios e a microambientes teciduais. O splicing alternativo e as modificações pós-traducionais diversificam as isoformas de CD44 e ajustam a ligação a ligantes e as saídas de sinalização. A expressão desregulada de CD44 e o uso de isoformas são frequentemente estudados em contextos como invasão e metástase tumoral, transição epitelial–mesenquimal, fibrose e tráfego de células imunes.

CD44 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CD44 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD44 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CD44 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CD44, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD44. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CD44 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD44 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD44 em células tumorais com expressão de CD44 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.