CD40 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-423444-ACT

マウスCd40は、抗原提示細胞に発現するTNF受容体スーパーファミリーの共刺激分子であるCD40をコードし、CD40–CD40L相互作用を介して獲得免疫を統括します。CD40シグナルはNF-κB、MAPK、PI3K経路を活性化し、樹状細胞の成熟、B細胞増殖、免疫グロブリンのクラススイッチ組換え、胚中心形成を促進します。さらに、サイトカインやパターン認識受容体（PRR）プログラムとのクロストークを通じて、T細胞のプライミングおよび炎症性分極を制御します。CD40活性の破綻は、自己免疫、慢性炎症、移植拒絶の生物学、ならびに腫瘍—免疫微小環境の制御に関するモデルで関与が示されており、マウス系における機構免疫学研究の重要なハブとなっています。

CD40 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Cd40の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CD40 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Cd40 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCd40転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CD40の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCd40遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCD40依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCd40発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCD40経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。