CD4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400237-ACT

ヒトCD4はI型膜貫通型糖タンパク質をコードし、主にヘルパーTリンパ球および樹状細胞やマクロファージの一部サブセットに発現しています。これらの細胞においてCD4は共受容体として機能し、TCR–MHCクラスII相互作用を安定化するとともに、LCKを介した近位シグナル伝達を増強します。CD4依存的シグナルはT細胞の活性化、分化、サイトカインプログラムに影響を与え、抗原提示や免疫シナプス形成を制御する経路を含む適応免疫応答の形成に関与します。CD4の発現や機能の異常は、炎症性疾患や自己免疫の文脈で免疫恒常性の変化と関連しており、また免疫細胞への指向性（トロピズム）に関わることから、宿主—病原体相互作用研究においても中心的な対象です。さらに、細胞表面の系統マーカーとしてCD4は、免疫腫瘍学やシステム免疫学の研究で免疫サブセットを層別化するために広く用いられています。

CD4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CD4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CD4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CD4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCD4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CD4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCD4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCD4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCD4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCD4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。