Plásmido CRISPR de Activación (h) CD34: sc-400197-ACT

El CD34 humano codifica una sialomucina transmembrana fuertemente glicosilada que sirve como marcador canónico de células madre y progenitoras hematopoyéticas y que también se expresa en células endoteliales vasculares. CD34 contribuye a la adhesión y al tráfico celular al modular las interacciones con selectinas y componentes de la matriz extracelular, lo que influye en el homing, la migración y la retención en el nicho dentro de los tejidos hematopoyéticos. Su expresión se regula de manera dinámica durante la diferenciación y se utiliza comúnmente para definir poblaciones con características de célula madre y enriquecidas en progenitores en hematopoyesis y biología vascular. Con frecuencia se observan patrones alterados de expresión de CD34 en diversas patologías hematológicas y vasculares, lo que respalda su utilidad para estudios mecanísticos del estado de linaje, de las interacciones con el microambiente y de la remodelación asociada a la enfermedad.

CD34 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CD34 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CD34 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CD34 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CD34, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CD34. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CD34 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CD34 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CD34 en células tumorales con expresión de CD34 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.