CD27L CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402625-ACT

ヒトCD70（CD27L）はTNFリガンドスーパーファミリーに属するII型膜貫通タンパク質で、主に活性化した抗原提示細胞および一部のリンパ球サブセットに発現します。T細胞、B細胞、NK細胞上のCD27と結合することで、CD70は共刺激シグナル伝達を担い、クローン増殖、生存、分化を制御して胚中心反応や免疫記憶に影響を与えます。この軸は、TNFRファミリーのシグナル伝達下流にあるNF-κBおよびMAPK関連の転写プログラムと統合され、サイトカイン産生や細胞傷害性エフェクター機能にも寄与します。CD70の発現異常は、複数の炎症研究および腫瘍学研究の文脈において、免疫活性化の変調や免疫回避の表現型と関連づけられており、腫瘍免疫学および免疫恒常性の研究で重要な標的となっています。

CD27L CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CD70の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CD27L CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CD70 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCD70転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CD27Lの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCD70遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCD27L依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCD70発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCD27L経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。