CD223 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-406616-LAC

LAG3 (CD223) codifica un recettore inibitorio di checkpoint immunitario espresso sui linfociti T attivati, sui linfociti T regolatori, sulle cellule NK e su sottopopolazioni di linfociti “esausti”. CD223 si lega all’MHC di classe II e ad altri ligandi per attenuare la segnalazione del TCR, modulando la funzione della sinapsi immunologica, la produzione di citochine e la differenziazione effettrice, e si integra con vie che regolano le soglie di attivazione e l’omeostasi immunitaria. LAG3 è spesso sovraespresso in contesti di esposizione antigenica cronica ed è un segno distintivo dei programmi di disfunzione dei linfociti T che co-occorrono con altre molecole di checkpoint. Alterazioni dell’espressione e della segnalazione di LAG3 sono quindi ampiamente studiate nell’immunologia dei tumori, nei modelli di infezione virale persistente e nell’infiammazione autoimmune come determinanti degli stati di immunosoppressione rispetto a quelli di attivazione immunitaria.

Le particelle di attivazione lentivirale CD223 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di LAG3 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale CD223 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione LAG3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di CD223. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo LAG3 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.