Plásmido CRISPR de Activación (h) CD206/Mannose Receptor/MMR: sc-400286-ACT

MRC1 codifica CD206, también conocido como el receptor de manosa de los macrófagos (MMR), una lectina tipo C transmembrana de tipo I expresada predominantemente por macrófagos y por subpoblaciones de células dendríticas. CD206 se une a glicanos que contienen manosa, fucosa y N-acetilglucosamina presentes en ligandos endógenos y microbianos, favoreciendo la endocitosis mediada por receptor, la fagocitosis y el procesamiento de antígenos. A través de su papel en la depuración, el reconocimiento de glicanos y la eliminación de glicoproteínas, MRC1 contribuye a la detección inmunitaria innata y a la modulación de programas de polarización inflamatoria. La expresión alterada de CD206 se utiliza con frecuencia como marcador de macrófagos activados alternativamente y se ha asociado con la remodelación del microambiente inmunitario en inflamación crónica, fibrosis y biología tumoral.

CD206/Mannose Receptor/MMR El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MRC1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CD206/Mannose Receptor/MMR El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MRC1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MRC1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CD206/Mannose Receptor/MMR. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MRC1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CD206/Mannose Receptor/MMR en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CD206/Mannose Receptor/MMR en células tumorales con expresión de MRC1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.