Plasmide CRISPR/Cas9 KO CCDC57 (m): sc-427913

Présentation

Ccdc57 code la protéine CCDC57 contenant un domaine coiled-coil, un facteur cytosquelettique et associé aux organites, dont on prédit l’implication dans l’organisation des processus dépendants des microtubules. Les protéines coiled-coil agissent fréquemment comme des échafaudages assurant l’intégrité du centrosome, le trafic intracellulaire et la progression du cycle cellulaire, reliant ainsi CCDC57 à des voies qui régissent la dynamique du fuseau mitotique et la régulation spatiale de la signalisation. Dans les modèles murins, la perturbation des protéines de ces réseaux est couramment étudiée pour ses effets sur la prolifération, la stabilité du génome et la différenciation cellulaire. Ainsi, CCDC57 est pertinent pour des recherches mécanistiques à l’interface de phénotypes du développement et de défauts liés aux maladies dans l’organisation du cytosquelette et le contrôle de la mitose.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CCDC57 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ccdc57 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ccdc57, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ccdc57 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CCDC57.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ccdc57 pour l'étude de la signalisation de CCDC57, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ccdc57 essentiels à la fonction de CCDC57
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ccdc57 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CCDC57 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le CCDC57 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ccdc57. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CCDC57 plasmide HDR (m) et le CCDC57 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ccdc57 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ccdc57 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.