caveolin-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419481

Übersicht

Mouse Cav3 kodiert Caveolin‑3, ein in der Muskulatur angereichertes Gerüstprotein der Caveolae, das Membran‑Mikrodomänen organisiert und die Signalübertragung am Sarkolemm koordiniert. Caveolin‑3 moduliert unter anderem die Mechanotransduktion, den vesikulären Transport und die Lokalisation von Ionenkanälen und beeinflusst dabei Signalwege wie die PI3K–AKT‑Signalgebung sowie die Regulation von Stickstoffmonoxid in quergestreifter Muskulatur. Eine veränderte CAV3‑Funktion wird mit gestörter Membranstabilität und Signalhomöostase in Skelett‑ und Herzmuskel in Verbindung gebracht, was seine Relevanz für Modelle von Myopathien und Kardiomyopathien unterstreicht. Cav3 wird daher häufig eingesetzt, um die caveolae‑abhängige Kontrolle der Muskelphysiologie, Membranreparatur und Signal‑Kompartimentierung zu untersuchen.

Das caveolin-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Cav3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Cav3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Cav3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die caveolin-3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Cav3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der caveolin-3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Cav3-Exone abzielen, die für die caveolin-3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Cav3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom caveolin-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom caveolin-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Cav3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das caveolin-3 HDR-Plasmid (m) und caveolin-3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Cav3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Cav3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.